분석항목 FAQ

유세포분석실은 유세포분석기와 유세포분리기를 이용한 세포 분석 및 분리 실험을 지원합니다. 주요 지원 항목은 세포 표면 마커 분석, 세포 내 마커 분석, 면역세포 아형 분석, 세포 주기 분석, 세포사멸 분석, 세포 증식 분석, 사이토카인 분석, 다중 형광 분석 및 cell sorting 등 입니다. 또한 장비 교육, 실험 목적에 따른 장비 셋팅, 분석 프로그램 사용 교육 등 장비 이용과 데이터 분석에 필요한 기술 지원을 제공합니다.
의뢰 또는 장비 사용료는 분석과 sorting의 여부 및 장비 기종 등에 따라 다릅니다. 담당자에게 문의하시면 수가를 확인할 수 있습니다.
분석 의뢰는 연구자가 준비한 검체와 실험 정보를 바탕으로 유세포분석실에서 장비 셋팅 및 데이터 분석을 하는 방식입니다. 장비 개인 사용은 장비 교육을 이수한 연구자가 예약 후 직접 장비를 사용하는 방식입니다. 개인 사용의 경우에도 사용이 어려운 경우 장비 셋팅을 지원 받을 수 있습니다.
단순히 세포 집단 확인이나 비율을 알고 싶다면 ‘분석’을, 특정 마커를 발현하거나 특정 조건을 만족하는 세포 집단을 분리해야 할 때는 ‘sorting”을 의뢰하면 됩니다. 예를 들어 특정 면역세포 subset, 형광 단백질 발현 세포, live/dead 기준을 통과한 세포, 특정 marker-positive 또는 marker-negative population 등을 분리할 수 있습니다. 분리된 세포는 후속 배양, 유전자 및 단백질 분석, 기능 평가 등 후속 실험에 활용할 수 있습니다.
유세포분석용 검체는 가능한 단일세포 현탁액 상태로 준비해야 하며, 세포 덩어리와 debris는 최소화해야 합니다. 필요 시 cell strainer를 이용하여 여과하고, 분석 목적에 맞는 cell concentration과 buffer 조건을 유지하는 것이 중요합니다. 세포 생존율이 낮거나 debris가 많은 검체는 분석 품질과 sorting 효율에 영향을 줄 수 있으므로 사전에 검체 상태를 확인하는 것이 좋습니다.
연구자는 실험 목적, 세포 종류, 사용 항체 및 형광 조합, 필요한 분석 항목, 예상 세포 수, 분석 또는 분리 후 활용 계획을 준비해야 합니다. 특히 sorting 의뢰의 경우 분리하고자 하는 population의 정의, 필요한 collection 세포 수, sorting 후 buffer 및 collection tube 조건을 사전에 확인하는 것이 필요합니다.
Sorting 직후 샘플을 회수하여 기기에서 바로 확인 가능합니다.
다만, collection 된 세포수(3x10^5 이하)가 너무 적은 경우 확인이 어려울 수 있습니다.
필요한 세포 수는 분석 목적, marker 수, control 개수, 분석하려는 population의 비율, sorting 여부에 따라 달라집니다. 분석의 경우 일반적으로 각 tube 당 3~5x10^5 cells가 필요하며, rare population을 분석하는 경우에는 더 많은 세포가 필요할 수 있습니다.  Sorting의 경우에는 원하는 population의 비율과 필요한 collection 세포 수를 고려하여 여유 있게 준비해야 합니다. 정확한 세포 수는 실험 조건에 따라 달라지므로 사전에 담당자와 확인하는 것이 좋습니다.
여러 형광을 동시에 사용하는 경우, 한 형광의 신호가 다른 detector에서도 일부 검출될 수 있습니다. 이를 보정하기 위해 compensation 또는 spectral unmixing이 필요합니다.
Control sample은 이러한 보정을 정확하게 수행하고, 양성 및 음성 population을 구분하기 위해 사용됩니다. Control이 적절하지 않으면 marker 발현이 실제보다 높거나 낮게 해석될 수 있으며, gating 기준도 불명확해질 수 있습니다. 따라서 다중 형광 분석에서는 control 준비가 필수적인 과정입니다.
데이터는 일반적으로 FCS 파일 형태로 제공되며, 필요 시 분석 프로그램에서 생성한 plot, population 통계값, gating 결과 등을 함께 확인할 수 있습니다. 의뢰의 경우 실험 목적에 따라 정리된 분석 결과를 제공할 수 있으며, 개인사용자는 분석 프로그램을 이용하여 직접 gating 및 결과 export를 수행할 수 있습니다.